配方奶有乳铁蛋白吗吗(如何判断宝宝所喝的配方奶粉中所含的乳铁蛋白含量是否充足呢)

配方奶有乳铁蛋白吗吗，如何判断宝宝所喝的配方奶粉中所含的乳铁蛋白含量是否充足呢？

婴儿的免疫系统约在一岁后才发育成熟，一岁内母乳喂养的婴儿可从母乳中获得丰富的活性免疫物质以提供保护。近几年婴儿配方奶粉的营养成分和产品质量，越来越受到广泛关注，因为对于人工喂养的婴儿来说，他们的部分甚至全部营养来自奶粉，所以奶粉的营养成分和质量就显得格外重要。母乳是婴儿营养的最好来源。因此母乳是配方奶粉的最佳参照标准。一些活性物质成份，如乳铁蛋白、免疫球蛋白和核苷酸等，在母乳中存在而普通配方奶粉中含量基微。我国现在也对添加乳铁蛋白婴儿配方奶粉进行了开发和研究，本文讨论的是一种婴儿配方奶粉中乳铁蛋白的检测方法。

乳铁蛋白(L a c t o F e r r n，以下简称为L F)是一种具有多种生物学功能的铁离子结合糖蛋白，主要存在于哺乳动物的乳汁当中。19 5 9年G r o v e s从牛乳中分离获得。L F在牛初乳中含量较高，约为1 g/L,母乳中的含量约为牛乳中的10倍。研究表明L F具有多种生物活性：能促进铁的吸收、广谱抗菌性、抑制游离基的形成、提提高免疫能力等。

目前常用的检测L F的方法主要有免疫扩散法、高效液相色谱法和电泳法。

免疫扩散法操作简单、快速，但只适用于L F含量较高时的检测，能能快速测定LF,但检测添加乳铁蛋白的配方奶粉时，因奶粉本身所含有的元素非常多必须进行前处理，而前处理过程往往会干扰到其中的L F；电泳法操作麻烦，而且不适于大量样品的检测。本文所建立的是利用酶联免疫反应的E L I S A法，操作方便、测出限灵敏、且能一次性定性定量检测较多数量的样品，是一种理想的L F检测方法。

1材料和方法

1.1试剂和仪器包被缓冲液(0.0 5 M碳酸盐一重碳酸盐，p H 9.6)；洗液(5 0田mo l N a C 1,0. 0 5 % T 2 0, p H 9. 6 ) ; 封闭液 ( 5 0mmol/LTr I s, 0. 14 m o 1 / L N a C 1, 1%BSA, pH8. 0 ) ; 样品广共轭稀释液(5 0mo 1/L T r I s, 0. 14 m ol / L N a酶底物(TMB底物，溶液B)；中止液H 2S04(2so4/L,上海化学试剂公司)；纯化山羊抗牛亲合乳铁蛋白(lmg/mL,S I g ma)；牛源乳铁蛋白准品(lm g/mL,S I gma)；山羊抗牛乳铁蛋白一H R P共轭物(lmg mL,S I gma)；酶联检测仪( B I o-R A D, M o d e 15 5 0)；酶标板(9 6孔，N u n c)；微量进样器(e p p e n d or f, 10 H L, 2 0 0(市购)。口L,1000pL,5mL)；婴儿配方奶粉收稿日期：2 0 0 8-01-1 2基金项目：国家"十一五"科技支撑计划(2 006BAD04A1 4 ) 。

1.2实验方法

1.2.1确定酶标板的数量，将包被抗体用包被缓冲12 2杜凌等：婴儿奶粉中乳铁蛋白的检测方法的研究收值读数，计数如下。表对应浓度(·/ngmL一1)液稀释(1:100)后，立即在每孔中注入1 0 0p L包被稀释液，室温下孵育6 0mi n后，洗板3次。410 nm时的光吸值读数。

A B C D E F G H

0. 0 0 0 0. 0410. 0 8 20. 2430. 3740. 638 1. 0 8 91. 8 3 0

2-0. 0 0 4 0. 0 4 2 0. 0970. 1930. 3910. 6 3 71. 1511. 8 0 0

3-0. 0010. 0 3 4 0. 0880. 2110. 4470. 6 4 21. 0 6 01. 8 2 3

1.2.2在每孔中注入2 0 0口L封闭液，孵育3 0mi n后洗板3次。(空白样)、乳铁蛋白1.2. 3在酶标板中加入对照样标样稀释液和2个待测样溶液，孵育6 0mi n后洗板5次。L F准溶由L F准品配制成分别为0 7. 815. 6 2 5 31. 2 562. 5125250500 5 0 0 n 9 lm L. 2 5 0 n g L. 15. 6 2 5 n 9lmL 和 7. 8n g/mL的溶液。

待测样I为市购婴儿配方奶粉，其乳铁白含量为3 0-60mg 10 0 g，称取1 0 g配成1 Om L的溶液，再将溶液稀释1倍成待测容液I；待测样其中：A 1为对照样，B 1-H 1分别为浓度为II.II I.IV为L F标准品配制的含量为3 0 n g/mL、6 O n 9lm L. 9 0 n 9lm L 的待测液。1.2.4酶标板每孔中注入1 00 L L F一H R P共轭物，孵育6 0mi n后洗板5次。L F一H R P共轭物用稀释液以1:10 0 0 0 0 0稀释。

2结果与讨论2.1结果根据上表的吸收值读数，求得A一H和待测样的平均读数，如下1.2.5将两个酶反应物等量混合均匀，在每孔中注入1 0 0 L，孵育2 0mi n，用中止液中止反应。1.2.6用酶联检测仪测定波长为410n m时的光吸

表2

吸收值平均读数对应的L F浓度(n g/mL)待测样读数待测样的平均读数一0.0 0 2 0待测样I 0. 0 4 7. 8 0. 3 2 4 0.08915.6 2 5待测样I I0. 21631. 2 5 0. 2 1 1 I 0.4 0 4 6 2.5待测样I I 0. 6391250. 3 8 6 1.12 5 0待测样I V 1. 8185000. 5 3 7

根据A一H和计数制定标准曲线图(如图1)，得多项式y一8 8. 104×2+118. 46×+1. 09 2 2,y为L F的含量，x为吸收值，R 2值为9 9.9 8%。根据待测样的读数，可求得待测样I的L F含量为4 8.7 6 n g/m L,待测样II的L F含量为3 0.0 6 n g/mL,待测样III的稀释至测限范围内检测。抗原如在4℃条件下包被过夜会更加稳定包被或反应的时间不同等因2 2.2因操作者不同、素均会影响最终结果，因此每次检测都需重新制订标准曲线，LF含量为5 9.9 4 n g/'m L,待测样I V的L F含量为9 0.11ng/ml。

2.2.3婴儿配方奶粉因其元素较多，干扰因素也较多，因此在检测时现配现检，同时注意稀释比例。LF含量(/n g田L一1)参考文献L1 1顾瑞霞，骆承庠，乳与乳制品的生理功能特性LW]，中国轻工业出版社，2 0 0 0. L2 1张英华，酶联免疫法测定牛初乳中乳铁蛋白的含量L J 1，中国乳品工业19 9 7 2 7。

2.2讨论

2.2.1经实验验证，在检测限7.8-50 0 n g/m L之间反应快速灵敏。如L F浓度过高时，蛋白质分子间相互作用力较大，可能会影响载体对蛋白质的吸附；如浓度过小，酶标板反应表面可能不能包被完全，也会对反应过程有影响。因此，建议待测样品。

为什么羊奶里不含乳蛋白？

羊奶粉本身是应该含有乳铁蛋白的，但是也不排除有些羊奶粉不含有乳铁蛋白不同的乳粉品牌和奶粉种类，对乳铁蛋白的选取也是不同的，羊奶配方中没有乳铁蛋白的原因，无论是在牛奶还是羊奶中，本身都不会含有适量的乳铁蛋白的，所以说一些羊奶配方中不再添加乳贴蛋白乳铁蛋白，其实，它是促进铁吸收的一个催化剂，可以提高人体的免疫能力。